在试管婴儿(尤其是针对染色体平衡易位/罗氏易位等结构异常患者的PGT-SR周期)过程中，“断点定位信息” 是胚胎植入前遗传学诊断(PGD)或PGT-SR的核心数据之一，其应用贯穿“设计→检测→移植→随访”全流程，具体做法如下：
一、预实验阶段：精准锁定断点坐标
夫妇双方外周血样本
• 使用长片段测序(stLFR WGS)、纳米孔三代测序或MicroSeq技术，一次性获得高分辨率断点坐标(精度可达数个Kb)。
• 结合Sanger测序验证，确保断点位置零误差，为后续探针/引物设计提供唯1靶点。
建立家族单倍型参考
• 若家系中有已生育的不平衡胚胎或先证者，将其DNA纳入单倍型分析，可进一步提高连锁分析的准确性。
二、胚胎活检与检测阶段：利用断点信息区分胚胎类型
靶向扩增/捕获
• 根据断点坐标设计特异性引物或捕获探针，对囊胚滋养层细胞DNA进行靶向扩增或杂交捕获，仅扩增断点两侧1–2 Mb区域。
• 结合NGS或SNP-array读取断点区域的SNP/Indel信息，判断胚胎是否携带易位染色体。
胚胎分类输出
• 完全正常(无易位染色体)
• 平衡携带(携带易位但基因总量正常)
• 不平衡(缺失/重复)
• 嵌合体(低比例易位细胞)
三、胚胎选择与移植阶段：断点信息指导临床决策
优先移植完全正常胚胎
• 断点信息可百分之百排除平衡携带胚胎，确保子代不再面临反复流产或生育困难。
• 若无可移植的正常胚胎，则选择低比例嵌合体或平衡携带胚胎，并告知后续产前诊断的必要性。
避免二次活检
• 断点信息一次获得后长久保存，后续周期仅需对新鲜胚胎进行靶向扩增，无需重复预实验，缩短检测周期、降低成本。
四、产前诊断与随访：断点信息作为金标准对照
孕中期羊水穿刺
• 使用与PGT相同的断点引物进行qPCR或MLPA，验证胎儿染色体状态，与PGT结果一致性>99.5%。
• 若PGT提示为低比例嵌合体，羊水结果可作为最终裁决。
新生儿随访
• 出生后采集脐带血或口腔拭子，再次确认断点状态，建立完整家系数据库，为家族后续生育提供参考。
五、技术对比与选择建议
• stLFR WGS / 纳米孔测序：长读长、无需PCR扩增，适合复杂/隐匿易位;成本较高，但断点一次到位。
• MicroSeq：显微切割+Sanger，成本低、操作简便，适合常规平衡易位;需PCR扩增，对低质量DNA或高度降解样本可能失败。
• SNP-array + 单体型连锁：无需断点坐标即可区分正常/携带胚胎，但无法区分新发与遗传易位，适合家系资料不全者。
总结，在试管婴儿周期中，断点定位信息 是PGT-SR的“导航坐标”：预实验阶段锁定准确坐标;胚胎检测阶段利用坐标区分胚胎类型;移植阶段指导胚胎优选;产前诊断阶段作为金标准验证;长期随访阶段为家族生育史提供完整数据。
通过将断点信息完整融入“PGT-SR-产前诊断-新生儿随访”全链条，可大限度提高平衡易位患者的活产率(60–73%)并彻底阻断染色体异常向下一代传递。
